По преданию, он был основан Иваном Грозным. Храм Вознесения сильно пострадал во время польско-литовского разорения и во второй половине XVII века была отстроен заново. Предположительная дата основания монастыря 1570 год. В период с 1627 по 1686 годы в Вознесенском монастыре была выстроена каменная церковь с двумя приделами, заменившая прежнюю, деревянную. Причиной строения каменной Вознесенской церкви, возможно, явился пожар, который произошёл в 1637 году. Строительство нового белокаменного двухпрестольного двухэтажного храма по проекту петербургского архитектора было начато в 1755 году. К 1761 году закончили и освятили Знаменскую церковь в нижнем этаже, а в 1763 году освятили верхний Вознесенский храм. По указу Екатерины II 14 февраля 1764 г., предполагавшему изъятие у церкви значительного количества земель, монастырь был упразднён, а Вознесенский храм стал приходской церковью с тем условием, что немногочисленные монахини останутся при ней. В 1794 году была увеличена на один ярус и увенчана шпилем трёхъярусная колокольня. В 1935 году храм был закрыт, а затем сильно пострадал во время немецкой оккупации. В 1950-х годах его попытались приспособить под клуб, для чего разобрали остатки венчающего собор восьмерика, все своды и верхние ярусы колокольни. Тогда же с запада пристроили большой двухэтажный тамбур. Но эти работы не были завершены, и сегодня один из древнейших храмов Старицы находится на грани исчезновения.